去内毒素琼脂糖微球4B是将内毒素类似底物键合在4B琼脂糖微球上形成的一种可利用亲和相互作用来实现目标产品纯化分离的亲和类介质。用于细菌内毒素的去除和生物大分子的纯化分离。

　　1.外观

　　本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

　　2.理化指标

　　*检测条件： 层析柱16mm×300mm  *柱床高5cm,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl

　　3．包装

　　产品以聚胺酯瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小、保质期、批号、生产日期、生产单位及地址” 等内容。所选用的包装应有利于保证产品质量、方便运输和贮存。

　　4. 运输

　　运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

　　5. 贮存

　　产品应密封贮存在4℃~30℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。

　　用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。

　　6.保质期：暂定2年。

　　7.应用

　　去内毒素琼脂糖微球4B是一种亲和层析介质，利用样品中组分亲和作用的不同进行分离。用于去除细菌内毒素和生物大分子的纯化分离。

　　去内毒素琼脂糖微球4B用于去除内毒素有2种使用方式：装柱吸附或加入样品溶液中振荡吸附。下面简要介绍装柱吸附的使用过程。

　　7.1 装柱

　　⑴让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）：20mmol/L、pH5.0的乙酸盐缓冲液。

　　⑵根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用注射用水（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。匀浆作脱气处理。

　　⑶将柱内及柱子底端用水润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。

　　⑷用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

　　⑸打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

　　7.2平衡

　　（1）先用10倍柱体积的1.0mol/LNaOH溶液洗涤。再用水洗到中性。

　　（2）让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是稀缓冲溶液，常用20mmol/L、pH5.0~8.0的乙酸盐或磷酸钾缓冲液，具体pH值视蛋白质样品而定。

　　7.3内毒素去除

　　⑴浑浊的样品要离心和过滤后上样。

　　⑵一般情况是让样品缓慢流过柱子，内毒素结合在柱子上，其他组分流出柱子后收集去除了内毒素的样品。

　　（3）若一次去除达不到要求，可以将流出物重新上样进行多次吸附。

　　（4）根据具体样品使用条件要有一定调整。

　　注：上述各步操作中用到的玻璃仪器、滤器均要250℃干烤2h；0.2µm滤膜要用0.1M NaOH浸泡过夜后121℃高压灭菌30min；水及溶液都要无内毒素；配制缓冲溶液的盐要在80℃烘4h后使用。

　　7.4再生

　　去内毒素琼脂糖微球4B可以再生后多次使用。

　　可用25倍柱体积0.2 mol/L NaOH+20%EtOH洗，再用25倍柱体积1.5 mol/L NaOH洗涤再生。用20mmol/L、pH5.0~8.0的乙酸盐或磷酸钾缓冲液平衡后可重复使用。

　　也可用pH7.2的缓冲溶液洗柱再生，其组成为20mmol/L PBS+15 mmol/L NaCl+0.1%SDC（脱氧胆酸钠）。用20mmol/L、pH5.0~8.0的乙酸盐或磷酸钾缓冲液平衡后可重复使用。