螯合高流速琼脂糖微球（Chelating Bio-sep 6FF）是将亚氨基二乙酸基键合在高流速琼脂糖微球上，在螯合金属离子Zn⁺²或Ni⁺³形成的一种亲和层析介质。广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的制备。

　　1. 外观：本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

　　2. 理化指标

项 目	指 标
配 基	-N(CH2COOH)2
基   质	6% 交联琼脂糖
形状		球形
粒径		50~160 μm
离子结合量（Zn2+）	24~30μmol/ml
最高流速(25℃)	≧370 cm/h
耐 压	0.3 MPa
耐 热	pH7.0水中120℃20min
pH适用范围	2~14 (短时间)；3~13(长时间)
化学稳定性	以下溶液中稳定； 1mol/L NaOH;20%EtOH; 0.01mol/L盐酸；

　　3．包装

　　产品以聚胺酯瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小、保质期、批号、生产日期、生产单位及地址” 等内容。所选用的包装应有利于保证产品质量、方便运输和贮存。

　　4. 运输

　　运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

　　5. 贮存

　　产品应密封贮存在4℃~30℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。

　　用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。

　　6.保质期：暂定5年。

　　7.应用：螯合琼脂糖微球是一种亲和层析介质，利用样品中组分中的组氨酸等氨基酸残基与金属离子的亲和吸附进行分离。用于生物大分子的纯化分离。下面简要介绍介质的使用过程。

　　7.1 装柱

　　⑴ 让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。

　　⑵ 根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。匀浆作脱气处理。

　　⑶ 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。

　　⑷ 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

　　⑸ 打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

　　7.2 螯合金属离子

　　本介质可以根据需要，螯合不同的金属离子，如Zn⁺²、Ni⁺³或Cu⁺²等。Cu⁺²与蛋白质结合较强，某些蛋白质只与Cu⁺²结合；Zn⁺²与蛋白质结合较弱，可进行选择性洗脱，得到目标产品；Ni⁺³可选择性地与带组氨酸的蛋白质结合。（用户可自行螯合，也可选择购买螯合了离子的介质）

　　在pH值偏酸性的条件下，让过量含金属离子的可溶性盐溶液缓慢地流过柱子，金属离子即被螯合在柱子上。

　　7.2 平衡

　　让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。

　　7.3 上样

　　⑴ 样品用平衡液配制，常用NaOAC 或PBS缓冲液，pH5.5~8.5。浑浊的样品要离心和过滤后上样。

　　⑵ 一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

　　⑶ 介质对样品组分吸附的程度取决于样品的性质、金属离子种类和流动相的性质。

　　7.4 洗脱

　　洗脱一般有两种方式：一是减小pH值，大多数蛋白质在pH 6到4的范围内可被洗下来；二是用一种竞争试剂，将蛋白质从柱子上置换下来，如用咪唑、组氨酸或氯化铵。用竞争试剂咪唑或减小pH值的洗脱洗下蛋白质，金属离子仍然在柱子上；若用竞争试剂组氨酸或氯化铵洗脱洗下蛋白质，会将金属离子和蛋白质的复合物一起洗下来。

　　洗脱常用增加竞争试剂或减小pH的分段洗脱或梯度洗脱。如0.05mol/L的PBS中含0.01~0.5mol/L的咪唑，做分段洗脱。

　　7.5 再生

　　若金属离子未流失，再生后接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若金属离子已流失或为了保险起见，要重新做螯合金属离子的7.2操作。若要换掉金属离子，可用EDTA溶液除去现在螯合的金属离子，再做新离子的7.2操作。

　　若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

　　7.6 在位清洗

　　⑴ 对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

　　⑵ 对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂蛋白类，可用1M NaOH 去除。

　　⑶ 对强疏水性结合的蛋白、脂蛋白类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。

　　清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。

　　7.7 注意

　　在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。

　　7.8 消毒

　　用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

　　7.9 灭菌

　　置介质于高压灭菌锅中120℃下20分钟。