交联6B琼脂糖微球是在6B琼脂糖微球的基础上通过交联使微球的刚性增强，理化性能提高，有利用于工业生产。该介质用于生物大分子的凝胶层析。

　　1. 外观

　　本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

　　2. 理化指标

项    目	指     标
基   质		6%琼脂糖凝胶
排阻极限		10000~4×106 (球蛋白)
形状	球形
粒径	50~160 μm
最高流速	30 cm/h*
耐压	0.025 MPa
耐热	pH7水中120℃20min
pH值稳定性	3~13(长时间)，2~14(短时间，在位清洗)
化学稳定性	可耐8mol/L尿素、6mol/L盐酸胍；可耐有机溶剂，如乙醇、DMF、THF、DMS、CH3Cl、丙酮、二甲基甲酰胺、二氯乙烷、吡啶、乙腈

　　*检测条件： 层析柱10mm×300mm  *柱床高15cm,25℃, 流动相为0.1mol/LNaCl

　　3. 包装

　　产品以聚胺酯瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小、保质期、批号、生产日期、生产单位及地址” 等内容。

　　4. 贮存

　　产品应密封贮存在4℃~25℃（保存溶液为20% 乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。

　　用过的柱子贮存在4℃（20% 乙醇）。

　　5. 注意事项

　　本品应避免与氧化剂接触，避免长时间暴露在空气中

　　6.运输

　　运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。

　　7.保质期

　　暂定5年。

　　8.应用

　　本产品具有很高的化学稳定性、高流速、较好的机械性能、可多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率　高，可用有机溶剂及1~2mol/L 的NaOH在位清洗，适用于工业规模生产，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的凝胶色谱纯化。

　　下面简要介绍介质的使用过程。

　　8.1 装柱

　　凝胶过滤介质的使用对装柱的要求较高，为了保证分离效果，一般通过柱子上加一个装柱器来使分离柱装满凝胶，或采用带有轴向加压装置的柱子。凝胶柱床一般高于60cm。装柱效果可用染料或丙酮-水溶液进行检验。

　　以下过程为通用介质装填过程。若为带有轴向加压装置的柱子，可在柱床稳定后将柱床压紧，接好管路。

　　⑴让所有的材料和试剂达到室温。配制缓冲液。凝胶层析上样、平衡和洗脱只用一种低盐浓度的缓冲液。

　　⑵选择一根一定直径的柱子，长约30~60cm,根据柱子大小取所需量的凝胶（约为柱床体积的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。匀浆作脱气处理。

　　⑶将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。

　　⑷  用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

　　⑸ 打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用缓冲液平衡柱子，到柱床稳定。

　　⑹最好用一个装柱器辅助装柱。装完后柱床上端轻轻刮平，上好柱头。

　　8.2平衡

　　让缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。

　　8.3上样

　　⑴样品用缓冲液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。含盐量过大、浓度过小的样品要先做处理，再上样。

　　⑵介质对样品组分的分离是按组分分子量大小进行的，分子量大的先流出来。

　　⑶上样体积约为柱体积的1~2%，越小分离越好。

　　8.4洗脱

　　用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。

　　8.5再生

　　一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。

　　8.6注意

　　在装柱、使用和保存柱子的时候，始终要避免柱子流干气泡进入。

　　若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

　　8.6 在位清洗

　　⑴ 对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

　　⑵ 对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH 去除。

　　⑶ 对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。

　　清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。

　　8.7注意

　　在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干气泡进入。

　　8.8 去热源

　　用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：

　　⑴ 2倍柱体积的70%乙醇

　　⑵ 2倍柱体积50mM Tris-Hcl pH7.5

　　⑶ 1倍柱体积4M尿素

　　⑷ 3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl

　　以上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制

　　8.9 消毒